IPTG 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷/重組蛋白表達(dá)誘導(dǎo)物/啟動(dòng)lacZ基因

產(chǎn)品關(guān)鍵詞：

IPTG 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷；X-gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷；β-半乳糖苷酶（β-gal，beta-gal）；lac repressor 乳糖阻遏物；lacZ Operon lacZ操縱子；Blue-white Screening 藍(lán)白斑篩選；CAS NO.: 367-93-1

基本描述:

IPTG，英文全名Isopropyl-beta-D-thiogalactoside，中文全名異丙基-β-D-硫代半乳糖苷，CAS NO：367-93-1，誘導(dǎo)細(xì)菌lac或tac操縱子調(diào)控的基因轉(zhuǎn)錄，尤其是水解酶β-半乳糖苷酶（β-gal，beta-gal）。一旦表達(dá)，β-gal水解β-半乳糖苷和乳糖為單糖。IPTG通常用于β-gal活性分析，當(dāng)含大腸桿菌來源lacZ基因的載體轉(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞后，編碼表達(dá)β-gal，細(xì)胞裂解后，通過催化底物ONPG的顏色反應(yīng)即可定量分析活性。IPTG也是硫代半乳糖苷轉(zhuǎn)乙酰基酶的底物，文獻(xiàn)報(bào)道還能誘導(dǎo)合成細(xì)菌青霉素酶。體內(nèi)研究IPTG的一個(gè)重要優(yōu)勢(shì)在于，IPTG不會(huì)大腸桿菌所代謝，IPTG濃度和lac p/o控制基因表達(dá)都保持穩(wěn)定。

IPTG誘導(dǎo)lacZ表達(dá)的作用機(jī)制:

IPTG的主要生理功能:

1）β-半乳糖苷酶（β-gal，beta-gal）活性檢測(cè)

β-半乳糖苷酶（β-galactosidase，β-gal）由大腸桿菌lacZ基因編碼，是zui常用的一種報(bào)告酶，用來研究哺乳動(dòng)物細(xì)胞的基因表達(dá)，蛋白-蛋白相互作用，以及標(biāo)準(zhǔn)化轉(zhuǎn)染效率。

檢測(cè)原理：IPTG誘導(dǎo)lacZ基因表達(dá)β-半乳糖苷酶（β-gal），細(xì)胞裂解后，體系中加入無色的ONPG（鄰硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷），被β-gal水解為鄰硝基苯酚（o-nitrophenol），生成黃色（420nm）。顏色反應(yīng)的強(qiáng)度與β-gal活性成正比

2）藍(lán)白斑篩選（Blue-white screening）

IPTG普遍用在需要誘導(dǎo)β-gal活性的克隆步驟中，zui為常見的就是和X-gal聯(lián)合使用進(jìn)行藍(lán)白斑克隆篩選，或與Magenta-gal聯(lián)合使用進(jìn)行紅/白斑克隆篩選。

作用機(jī)理： 當(dāng)目的基因插入載體lacZ基因，破壞β-gal表達(dá)并阻止其表達(dá)。細(xì)菌在含X-gal的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，β-gal水解此底物生成一不可溶藍(lán)色產(chǎn)物，菌落呈藍(lán)色。若β-gal不能表達(dá)，細(xì)菌克隆則無法催化X-gal底物，菌落呈白色，以此區(qū)分轉(zhuǎn)化重組載體或非重組載體的克隆子。

3）重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)

IPTG也可用于重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)。在這些體系中，待研究蛋白在IPTG誘導(dǎo)型啟動(dòng)子下游編碼。IPTG誘導(dǎo)待研究蛋白表達(dá)，對(duì)細(xì)胞裂解后，使用一系列合適方法來純化蛋白，如His-tag或GST-tag純化系統(tǒng)（融合相應(yīng)標(biāo)簽的重組蛋白）。

產(chǎn)品特性

1）CAS NO：367-93-1

2）英文同義名：Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside; Isopropyl β-D-thiogalactoside; IPTG;

3）中文同義名：異丙基-β-D-硫代半乳糖苷；異丙基 β-D-1-硫代半乳糖吡喃糖苷；

4）分子式：C₉H₁₈O₅S

5） 分子量：238.30 g/mol

6）  純度：≥99%（基于干重，HPLC）

7）   外觀：白色結(jié)晶粉末

8）   雜質(zhì)：≤0.1% Dioxane（二氧六環(huán)）

9）   溶解性：溶于水、乙醇

10）化學(xué)結(jié)構(gòu)：

使用方法【詳見maokangbio】

1. IPTG儲(chǔ)存液配制
2. 藍(lán)白斑篩選方法
3. IPTG誘導(dǎo)重組蛋白的表達(dá)

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 IPTG 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷

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